根据临床表现、分泌物涂片或结膜刮片等检查，可以诊断结膜刮片和分泌物涂片通过Gram和Gimsa染色，可在显微镜下发现大量多形核白细胞和细菌。为明确病因和指导治疗，对于伴有大量脓性分泌物者、结膜炎严重的儿童和婴儿，以及治疗无效者，应进行细菌培养和药物敏感试验，有全身症状的还应进行血培养。
检查时可见眼睑肿胀，结膜见上下睑被分泌物连在一起。当病变侵及角膜时，畏光、疼痛及视力减退等症状明显加重。少数患者可同时伴有上呼吸道感染或其他全身症状。
检查时可见眼睑肿胀，结膜充血呈鲜红色，以睑部及穹隆部结膜最为显著，严重的结膜表面可覆盖一层易于揉掉的伪膜，所以又称伪膜性结膜炎;球结膜不同程度充血水肿，失去透明度。角膜与结膜表面、睑缘等部位有粘液性或脓性分泌物覆盖。如果是kochweeks杆菌或肺炎双球菌感染，可出现结膜高度充血水肿并伴有散在性小点片状出血。角膜并发症主要是由kochweeks杆菌引起，表现为卡他性角膜边缘浸润或溃疡，病变开始呈浅层点状角膜浸润，位于角膜缘内侧，以后浸润互相融合，形成弓形浅层溃疡，痊愈后可遗留云翳。
红眼病的诊断依据
1、暴发流行，传染性强;
2、有剧烈的疼痛、畏光、流泪等重度刺激症状和水样分泌物;
3、结膜高度充血、水肿，球结膜下出血;
4、角膜弥漫点状上皮脱落;
5、耳前或颌下淋巴结肿大;
6、个别病例结膜炎消退后出现下肢麻痹。